微生物细胞的固定方法有哪些常用的是哪种
固定有物理方法和化学方法两种。用干燥高热和低温骤冷等方法进行固定称为物理方法固定,如血液涂片就是干燥固定;细菌涂片可以用加热法固定;冰冻切片是利用低温骤冷。化学方法固定就是用化学试剂配制成固定液使之固定。
废水处理中常用微生物固定化方法主要有:包埋法交联法载体结合法。
固定化方法大致包括:夹心法吸附法包埋法交联法共价结合法微胶囊法。
这是因为细胞个大,而酶分子很小;个大的细胞难以 或 ,而个小的酶容易从 中漏出。 包埋法法固定化细胞即将微生物细胞 包埋在不溶于水的 中。常用的载体有 和等。
平板划线接种法(分离培养法)这种方式是将细菌分离培养的常用技术,其目的是将混有多种细菌的培养物,或标本中不同的细菌(病原菌与非病原菌)使其分散生长,形成单个菌落或分离出单一菌株,便于识别鉴定。
流式细胞仪检测可以提前将细胞固定吗
1完全可以的。要先固定并对细胞膜最通透性处理,然后再染色就可以了。
2流式细胞仪检测细胞内的蛋白需要把细胞固定,然后细胞膜通透处理,再染色。不少公司,比如BD都有成套的试剂供应,固定,通透一次性完成。然后就是使用非特异性的同种动物血清(和抗体一个物种,比如小鼠血清)来封闭。
3对细胞进行固定处理。固定剂会影响细胞的活性和形态,影响流式细胞仪的检测结果,流式细胞仪获取标本的注意事项中对细胞进行固定处理不正确,在流式细胞仪获取标本时,直接将新鲜或保存的细胞样本进行检测,无需进行固定处理。
几种细胞固定方法
1固定化方法的选择 (1)培养规模。由于各种固定化系统可以获得相同的细胞密度,且细胞的产率主要取决于细胞的扩散,因此反应器的体积是培养规模放大的主要决定因素。
2超过滤法多种固定化方法联用等7种常用方法;成庆利等按有无外加载体将细胞固定化方法分为有载体固定化法和无载体固定化法2种;张磊等按照固定化载体与方式的不同将其分为吸附法包埋法共价结合法和胶联法。
3它是一种简单易行条件温和的固定化方法,但用它固定的生物体不够牢靠,容易脱落。2,交联法 交联法又称无载固定化法,是一种不用载体的工艺,通过化学物理手段使生物体细胞间彼此附着交联。
4吸附法 利用各种吸附剂,将细胞吸附在其表面而使细胞固定的方法称为吸附法。用于细胞固定化的吸附剂主要有硅藻土多孔陶瓷多孔玻璃多孔塑料金属丝网微载体和中空纤维等。
细胞生物学实验中常用来固定细胞或细胞器的方法有哪些
器官培养方法很多,最经典的方法即表玻皿器官培养法;一种最常用的方法是不锈钢金属网格法及Wolff培养法和扩散盒培养法,实验者可根据情况选择采用。
超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物。光学和电子显微镜可以对细胞进行定性和定位研究,如免疫荧光技术,冰冻蚀刻技术,同位素示踪技术。
在生物学研究中,科学家们常常利用这种能自己发光的荧光分子来作为生物体的标记。将这种荧光分子通过化学方法挂在其他不可见的分子上,原来不可见的部分就变得可见了。
细胞器的分离,一般采用差速离心法,此法是利用细胞各组分质量大小不同,在离心管不同区域沉降的原理,分离出所需组分,分离得到的细胞器,其纯度可采用电子显微镜法免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。
通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法。 实验原理 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。
固定细胞的方法
1培养规模。由于各种固定化系统可以获得相同的细胞密度,且细胞的产率主要取决于细胞的扩散,因此反应器的体积是培养规模放大的主要决定因素。虽然微载体系统可以提供最大的单元操作,但其他系统也可以通过增加单元套数而获得放大。
2在培养板中培养好细胞后,吸除培养基,使用PBS轻洗细胞2×3min,做固定(凋亡的TUNEL染色等可以不清洗)。固定:加入4%多聚甲醛(PBS配制)固定20分钟。
3灌流固定法 此法是经血管途径,将固定液灌注到欲固定的器官内,使生活的细胞在原位及时迅速固定,取下组织之后再浸入相同的固定液内继续固定。
4酵母细胞的固定采用方法一般是包埋法。是将酶或细胞包埋在能固化的载体中。如将酶包裹在聚丙烯酰胺凝胶等高分子凝胶中,或包裹在硝酸纤维素等半透性高分子膜中,前者包埋成格子型,后者包埋成微胶囊型。